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目的 原核表达、纯化重组破伤风毒素C片段(rTTC),并进行活性鉴定.方法 采用PCR法从破伤风梭菌基因组DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pThioHisA中,构建重组表达质粒rTTC-pThioHisA,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.表达的rTTC蛋白经离子交换、凝胶层析两步纯化后,采用Western blot、免疫双扩散及动物免疫试验进行活性及免疫原性鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白以包涵体和可溶性形式存在;纯化的重组蛋白纯度大于95

作者:付作申;花艳红;金贞姬;伊纯德;苏彩霞;陈尔佳;刘勇;邵一鸣

来源:中国生物制品学杂志 2010 年 23卷 3期

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作者:
付作申;花艳红;金贞姬;伊纯德;苏彩霞;陈尔佳;刘勇;邵一鸣
来源:
中国生物制品学杂志 2010 年 23卷 3期
标签:
破伤风毒素C片段 原核表达 纯化 活性 Tetanus toxin fragment C (TIC) Prokaryotic expression Purification Activity
目的 原核表达、纯化重组破伤风毒素C片段(rTTC),并进行活性鉴定.方法 采用PCR法从破伤风梭菌基因组DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pThioHisA中,构建重组表达质粒rTTC-pThioHisA,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达.表达的rTTC蛋白经离子交换、凝胶层析两步纯化后,采用Western blot、免疫双扩散及动物免疫试验进行活性及免疫原性鉴定.结果 重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确;表达的重组蛋白以包涵体和可溶性形式存在;纯化的重组蛋白纯度大于95