目的 克隆猪干扰素α(IFNα)基因,并在毕赤酵母中进行表达.方法 用植物血凝素诱导猪外周血中的淋巴细胞,Trizol试剂提取总RNA,经RT-PCR扩增猪IFNα基因,将其克隆至pPIC9K载体中,构建重组真核表达质粒pPIC9K-IFNα,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,电转化至毕赤酵母GS115中.筛选阳性菌株,经甲醇诱导表达后,进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果 RT-PCR扩增获得521bp的猪IFNα基因;所构建的重组表达质粒经PCR、酶切及测序鉴定正确;表达的目的蛋白相对分子质量约为19 000,可溶性蛋白约占菌体总蛋白的13
作者：李鹏飞；李明；程健；李伟伟；马鸣潇；张蕾
来源：中国生物制品学杂志 2010 年 23卷 4期
