目的 检测人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因沉默对卵巢癌细胞株A2780生长抑制和凋亡的影响,并探讨其与p53、p21基因表达激活的相关性.方法 设计合成针对hTERT基因的shRNA干扰质粒,与可表达荧光蛋白的pGenesil-1.1质粒连接,构建重组质粒pG1、pG2和阴性质粒pGCR,转染A2780细胞,采用荧光定量RT-PCR检测转染细胞hTERT基因mRNA的表达,Western blot检测细胞hTERT、P53和P21蛋白的表达,TRAP法检测细胞的端粒酶活性,CCK-8法检测细胞的生长,流式细胞术分析细胞周期,AnnexinⅤ-PE/7AAD双染和TUNEL法检测细胞凋亡.结果 酶切及测序结果证实重组质粒pG1、pG2和pGCR构建正确,质粒pG1和pG2转染可明显下调A2780细胞hTERT的表达水平和端粒酶活性,而上调细胞P53和P21蛋白的表达水平;沉默hTERT基因表达能够引起A2780细胞的生长抑制和G0-G1期细胞比例明显下降,并出现明显的细胞凋亡.结论 针对hTERT基因的shRNA干扰质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌A2780细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关.
作者：罗祎；姚珍薇；杨雅莹；易永芬
来源：中国生物制品学杂志 2011 年 24卷 7期
