目的 构建携带结核分枝杆菌PPE68基因的重组卡介苗(BCG),并检测其诱导小鼠的免疫应答情况.方法 将带有分枝杆菌复制子OriM的穿梭质粒pBudCE4.1/PPE68/OriM电转化入BCG中,PCR鉴定重组BCG.用鉴定正确的PPE68/OriM重组BCG免疫BALB／c小鼠,每2周免疫1次,共3次,末次免疫后2周采血,分离血清,检测血清中IgG2a、IFNγ和IL-12水平;取脾、肺,分离脾淋巴细胞,检测经特异性蛋白刺激后淋巴细胞的增殖水平;进行脾CD4+和CD8+T淋巴细胞计数,计算CD4+/CD8+比值;检测脾、肺荷菌量并观察组织病理变化.结果 PPE68／OriM重组BCG经PCR鉴定构建正确;其免疫小鼠后,可诱导小鼠血清中IgG2a、IFNγ和IL--12水平显著增加(P＜0.05),脾淋巴细胞增殖显著(P＜0.05),CD4+和CD8+T细胞百分比增加,CD4+／CD8+T细胞比值降低,脾、肺均无菌落生长且未见明显病理改变.结论 成功构建了PPE68基因重组BCG,其免疫BALB/c小鼠能明显提高小鼠的Th1型免疫效应,有利于机体抗结核菌感染.
作者：王静娴；徐蕾；何永林；张壮苗；董志玲；冯鑫；杨春
来源：中国生物制品学杂志 2012 年 25卷 6期
