目的 制备戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)重组蛋白P179抗原单克隆抗体及抗原检测试剂盒.方法 以4型HEV ORF2重组蛋白P179免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法进行克隆化培养,制备腹水,并对杂交瘤细胞进行染色体计数,鉴定单抗亚类及特异性、并检测稳定性；经SDS-PAGE分析抗体纯度,以免抗179抗原多抗作为包被抗体,HRP标记P179单抗作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,制备试剂盒,并进行最佳线性范围测定、准确性、精密性和稳定性验证.结果 获得4株能稳定分泌抗P179抗原单抗的杂交瘤细胞株,分别命名为3A10、3F8、4E9和5G6,腹水抗体效价分别为1∶10-7、1∶10-6、1∶10-6和1∶10-7,染色体数分别为96、98、101和99条；亚类分别为IgG2a、IgG2a、IgG1和IgG2b;4株单抗连续传代3个月,液氮冻存1年抗体效价未发生变化；制备的试剂盒有良好的线性(R2＞0.950 0)、准确性、精密性,试验内变异系数为4.17％～6.26％,回收率在87.9％ ～ 114.8％之间,试验间变异系数为5.82％～8.01％,回收率在90.8％ ～ 108.9％之间；于37℃及4℃放置3d,仍具有良好的稳定性.结论 成功制备了戊型肝炎病毒P179抗原单克隆抗体及抗原检测试剂盒,可用于戊型肝炎疫苗生产
作者：王玉梅；孟多佳；时成波；张宁；常军亮；迟春萍；曹玉锋；于爱东
来源：中国生物制品学杂志 2012 年 25卷 8期
