目的 克隆B型肉毒毒素轻链Bont-B基因,使其在大肠杆菌内表达,并对表达的重组蛋白进行纯化.方法 设计并人工合成Bont-B基因,克隆入表达载体pMD 19-T中,构建质粒pMD 19-T-Bont-B,经酶切后与pET-28a载体连接,构建重组表达质粒pET-28a-Bont-B,将重组表达质粒转化感受态大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达.表达产物经SDS-PAGE及Western blot分析后,经金属螯合层析Cu2+柱进行纯化,纯化产物经SDS-PAGE分析纯度.结果 重组表达质粒pET-28a-Bont-B经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约50 000,主要以可溶性形式表达,表达量约占菌体总蛋白的6％;纯化后的重组蛋白纯度可达90％以上.结论 已成功克隆并在大肠杆菌BL21(DE3)中原核表达了Bont-B轻链基因,为制备抗Bont-B轻链单克隆抗体及研究肉毒中毒机制和治疗奠定了基础.
作者：刘雪；张国利；陈萍；田园；岳玉环；吴广谋；张亮；冯越；朱平
来源：中国生物制品学杂志 2013 年 26卷 5期
