目的 构建人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)质粒,并探讨其对不同p53状态卵巢癌细胞SKOV3(缺p53)和OVCAR3(含p53)生长和凋亡的影响.方法 设计并合成针对hTERT基因的siRNA,与表达的质粒pGenesil-1连接,构建重组表达质粒pG1、pG2和pGCR(阴性对照质粒),分别转染卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3,并设未转染细胞对照组和转染空载体对照组.转染后48 h,荧光显微镜观察并计算转染效率；实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hTERT基因mRNA的表达；Western blot检测转染细胞中hTERT、p53和p21蛋白的表达；端粒重复序列扩增(Telomeric repeat amplification portocol,TRAP)法检测转染细胞端粒酶的活性；CCK-8法检测细胞生长情况；流式细胞仪和Annexin V-PE/7-AAD双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡的情况.结果 已成功构建了靶向hTERT siRNA重组质粒pG1、pG2和阴性对照质粒pGCR,具有较高的转染效率,与pGCR转染组相比,pG1和pG2转染组hTERT基因和蛋白表达(P＜0.05)及端粒酶活性均明显降低,pG1和pG2转染组均可抑制两种细胞的生长,且对OVCAR3细胞的抑制作用强于SKOV3细胞；pG1和pG2转染组G0-G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显增多(P＜0.05)；在OVCAR3细

作者：罗祎；姚珍薇；杨雅莹；易永芬

来源：中国生物制品学杂志 2013 年 26卷 6期