目的 以弗氏链酶菌为出发菌,使用化学诱变剂甲基磺酸乙酯(Ethylmethylsulfone,EMS)和5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)复合诱变,选育高产弹性蛋白酶突变菌株.方法 用高氏培养基培养弗氏链霉菌,收集菌悬液经摇瓶发酵培养后,加入6 mg/ml 5-FU进行诱变处理,收集处理液,经10倍系列稀释(10-1～ 10-7)后,涂布初筛培养基平板,选取透明圈出现较早和HC(透明罔直径/菌落直径)值较大的菌株培养后,加入2％ EMS,37℃分别作用0、15、30、45、60 min,涂布牛奶培养基,计数菌落数,计算菌悬液存活率,选择合适条件进行复合诱变选育高产弹性蛋白酶突变菌株,选取HC值较大的5个菌株,进行摇瓶发酵培养,采用Sacher法检测弹性蛋白酶活力.结果 弗氏链霉菌菌液经0.6mg/ml 5-FU处理后,经2％ EMS作用30 min进行复合诱变,孢子存活率为l6.1％;经初筛、复筛,获得高产生弹性蛋白酶菌株,酶活力达35.98 U/ml,比出发菌株提高了35.6％.结论 选择5-FU浓度为0.6 mg/ml,EMS浓度为2％作用30 min时,对弗氏链酶菌进行复合诱变,其诱变效率高,可获得高酶活的突变株.
作者：金永发；孙长胜
来源：中国生物制品学杂志 2014 年 27卷 3期
