目的 观察Klotho基因高表达对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠肾脏的保护作用.方法 采用RT-PCR法从健康Wistar大鼠肾脏中分段扩增Klotho基因,将两段基因连接后,亚克隆至腺病毒载体shuttle中,构建重组质粒shuttle/Klotho,与腺病毒骨架质粒共转染AD293细胞进行包装后,检测重组腺病毒的滴度.经Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)复制DN模型,将DN模型大鼠随机分成DN组、Ad组和Klotho组,从糖尿病(diabetes mellitus,DM)模型建立成功后2周开始,Ad组每只经尾静脉注射3×108 PFU不含Klotho基因的腺病毒,Klotho组每只经尾静脉注射3×108 PFU含Klotho基因的重组腺病毒,DN组每只经尾静脉注射等体积生理盐水;并设对照组(即Con组,制备糖尿病模型时,经腹腔注射等量柠檬酸缓冲液,治疗时经尾静脉注射等体积生理盐水).各组均每2周注射1次.实验期间,每天观察各组大鼠一般情况.分别于糖尿病模型建立成功后第4、8、16周,称量大鼠体重并处死,取左侧肾组织称重,计算肾脏指数(renal index,RI);显微镜下观察肾脏的病理学改变;RT-PCR法检测大鼠肾脏组织中Klotho基因mRNA的转录水平;ELISA法检测尿微量白蛋白水平,比浊法检测血尿素氮和血肌酐水平.结果 酶切及测序鉴定证实克隆的Klotho基因正确.含Klotho基因

作者：张晓暄；张小东；杨晓春；刘宝玲；远航；程海涛

来源：中国生物制品学杂志 2014 年 27卷 8期