目的 应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16,CVA16)病毒样颗粒(virus-like particle,VLP),通过条件优化,提高VLP的表达量,纯化后检测其免疫原性.方法 对CVA16结构蛋白基因P1及蛋白酶基因3CD进行密码子优化,插入启动子P10改造为CMV的重组杆状病毒表达载体pFastBac Dual-CMV中,获得重组穿梭质粒pFastBac Dual-CMV-P1-3CD,转化DH10 BacTM Competent Cells,提取重组杆粒Bacmid-CMV-P1-3CD,转染Sf9细胞,组装成重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD,并进行扩增,采用间接免疫荧光法、Western blot法及透射电镜观察对表达产物进行初步鉴定.对重组CVA16 VLP的表达条件(病毒接种MOI值、感染时间及细胞培养方式)进行优化后,通过20％蔗糖垫层及氯化铯连续密度梯度离心法纯化CVA 16VLP,并通过腹部皮下注射免疫ICR小鼠3次,采用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度,微量中和试验法检测血清中和抗体滴度.结果 重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD经PCR及测序鉴定证实组装成功;重组CVA16 VLP在Sf9细胞中成功表达,优化的表达条件为:重组杆状病毒AcMNPV-CMV-P1-3CD按MOI=5接种,Sf9细胞采用悬浮培养方式悬浮培养96 h,收集细胞及培养上清;纯化的CVA16 VLP纯度可达90％以上,针对VP2的单克隆抗体能与V

作者：陈祥鹏；毛乃颖；张勇；谢正德；许文波

来源：中国生物制品学杂志 2014 年 27卷 11期