目的 建立一种脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(CRM 197)结合物中游离多糖含量的检测方法,并进行验证.方法 根据脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,NaDC)在酸性条件下可沉淀蛋白的原理,分别对标准蛋白溶液和CRM197蛋白溶液进行酸沉淀处理,考察其蛋白沉淀效果;向脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中标加多糖衍生物,计算加标回收率,验证方法的准确性;分别采用NaDC沉淀法处理脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素(A、C、Y、W135群)结合物,检测其游离多糖含量,试验重复6次,验证方法的重复性;向标准蛋白溶液中标加不同浓度的NaDC溶液,验证NaDC对蛋白检测的干扰,考察方法的耐用性.结果 不同浓度的标准蛋白溶液经NaDC沉淀法处理后,蛋白浓度在100～ 300 μg/ml范围内,沉淀中蛋白回收率在90％ ～ 110％之间,蛋白浓度大于300 μg/ml的样品回收率显著降低;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物标加多糖衍生物后,再经NaDC沉淀法处理后的游离多糖含量回收率均在80％ ～ 110％之间;4种脑膜炎球菌多糖-CRM197结合物6次检测结果的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均＜15％;当溶液中NaDC的浓度不高于2％时,对蛋白检测无干扰.结论 NaDC沉淀法准确性、重复性和耐用性良好,可用于脑膜炎球菌多糖-白喉类毒素结合物中游离多糖含量的测定.
作者：朱涛；朱婉玉；宇学峰；毛慧华；邵忠琦
来源：中国生物制品学杂志 2015 年 28卷 4期
