目的 构建信号调节蛋白-α(signal regulatory protein-α,SIRP-α)基因真核表达质粒,并于A549细胞中进行表达.方法 提取HepG2细胞总RNA,RT-PCR扩增SIRP-α基因片段,克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)-EGFP中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP.将重组表达质粒转染A549细胞,转染24 h后,荧光显微镜下观察转染情况;转染48 h后,RT-PCR检测SIRP-α基因的转录水平;转染72 h后,Western blot法检测SIRP-α蛋白的表达.结果 经双酶切和测序鉴定真核表达质粒pcDNA3.1 (+)-SIRP-α/EGFP构建正确;转染pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP的A549细胞于荧光显微镜下可见绿色荧光;RT-PCR检测结果可见243 bp目的条带,Western blot检测显示SIRP-α存在.结论 成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-SIRP-α/EGFP,并于A549细胞中有效表达,为进一步研究SIRP-α与肺癌的相关性奠定了基础.
作者：杨臣臣；毕艳红；曾韦锟；井申荣；黄芬
来源：中国生物制品学杂志 2015 年 28卷 5期
