目的 评价CpG ODN、氢氧化铝[Al(OH)3]和大肠埃希菌不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT)无毒突变体联合佐剂对猪轮状病毒(porcine rotavirus,PRV)△VP8*亚蛋白免疫效果的影响.方法 将LT A亚基上63位丝氨酸突变为赖氨酸,构建LT的无毒突变体重组表达质粒pET-30a(+)-LTK63,于E.coli表达重组蛋白LTK63,并进行纯化.将小鼠随机分为LTK63+ Al(OH)3组、CpG ODN+ Al(OH)3组、CpG ODN+ LTK63+ Al(OH)3组及Al(OH)3对照组,将P2-SB-1A △VP8*抗原蛋白分别与各组相应佐剂共同免疫小鼠,均经颈部皮下注射,隔2周免疫1次,共3次,于每次免疫后14 d采血,分离血清,间接ELISA法检测血清抗体效价及IgG亚型;末次免疫2周后,MTT法检测小鼠特异性淋巴细胞的增殖.结果 经双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-30a(+)-LTK63构建正确;表达和纯化产物经SDS-PAGE及Western blot分析,均可见相对分子质量约33 000(A亚基)和13 000(B亚基)的目的蛋白条带.二免后,CpG ODN+ LTK63+ Al(OH)3组的抗体滴度显著高于LTK63+ Al(OH)3组、CpG ODN+ Al(OH)3组和Al(OH)3对照组(P＜ 0.05);末次免疫后2周,CpG ODN+ Al(OH)3组抗体滴度显著高于Al(OH)3对照组、CpG ODN+ LTK63+Al(OH)3组和LTK63+ Al(OH)3组(P＜0.001);CpG ODN+ LTK63+Al(OH)3和LTK63+ Al(OH)3组小

作者：冉旭华；魏晓曼；闻晓波；曹思；张峣；崔玉东

来源：中国生物制品学杂志 2015 年 28卷 8期