目的 建立测定人血清中抗伤寒Vi多糖特异IgG抗体含量的ELISA方法,并进行验证.方法 以美国国立卫生研究院(National Institutes of Health,NIH)测定Vi抗体的ELISA方法为主要参考,对包被抗原、不同吸附力酶标板、抗原包被浓度、样品反应条件、显色时间进行优化,建立测定人血清中抗伤寒Vi多糖IgG抗体含量的ELISA方法,并对建立的方法进行特异性、线性、准确性、精密度、最低检测限验证.结果 优化的ELISA法为:以伤寒Vi多糖作为包被抗原,costar92592型酶标板作为检测酶标板,2.0μg/ml为抗原包被浓度,20 ～ 25℃过夜为样品的反应条件,在40～ 80 min内(A405值在1.8～2.5之间)终止显色.质控血清经不同含量多糖吸收后,抗体含量与多糖浓度具有明显的浓度依赖关系,多糖抑制率最高可达92％;血清稀释度与抗体含量存在负相关的线性关系,R2=0.999;本试验检测的质控血清抗体浓度为76.80 EU/ml,变异系数(CV)=8.55％,与美国NIH检测的数据(75 EU/ml,CV≤15％)一致性良好;该方法重复性(CV≤15％)及中间精密度(CV≤20％)均符合要求;最低检测限为0.78 EU/ml.结论 建立了人血清中抗伤寒Vi多糖特异IgG抗体含量ELISA检测方法,该方法特异性、线性、准确性、精密度良好,可快速、准确地检测人血清中抗伤寒Vi多糖IgG抗体含量.
作者：刘月萍；范锋锋；周海飞；许博；王欣茹；金鑫；赵志强；祝秉东；谢贵林
来源：中国生物制品学杂志 2015 年 28卷 10期
