目的 检测锌指蛋白转录抑制因子14(positive regulatory domain zinc finger protein 14,PRDM 14)5'非翻译区(5 ' untranslated region,5'UTR)内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)的活性.方法 PCR扩增PRDM14 5'UTR各截短序列的基因及全长基因,分别插入至双荧光素酶和红绿荧光报告基因中,构建重组质粒pRL-PRDM14 S1-FL、pRL-PRDM14 S2-FL、pRL-PRDM14 S3-FL及pG-PRDM 14-R.将各重组质粒分别转染HEK293细胞,检测PRDM14 5'UTR IRES元件的活性、内部剪切位点和自身启动子的活性及影响IRES活性的序列.将重组质粒pRL-FL/5'UTR分别转染HCT-8/WT、Hep-2、Bel7402/WT和NIH3T3细胞,检测各细胞中PRDM14 5'UTR IRES元件的活性.结果 PRDM14 5'UTR具有内部核糖体进入位点元件活性;不具有内部剪切位点和自身启动子活性;PRDM14 5'UTR的活性激活中心位于25 ～ 60 nt,活性抑制中心位于60 ～ 95 nt;除NIH3T3细胞外,其他细胞均具有IRES活性.结论 PRDM14 5'UTR具有典型的IRES活性,为今后深入研究PRDM14表达的调控机制奠定了基础.
作者：丁鹏鹏；马文囡；朱瑞宇；陈蕴；金坚
来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 1期
