目的 建立检测水痘减毒活疫苗中乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na)残留量的高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC),并进行验证.方法 采用TC-C18色谱柱(250mm×4.6 mm);流动相:磷酸二氢铵,四丁基氢氧化铵,乙腈溶液;流速:0.8 ml/min;检测波长:257 nm;进样量:20μl.对该方法的系统适用性、专属性、准确性、线性、检测限及定量限及耐用性进行验证.应用建立的方法检测4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量.结果 试验的目标峰理论塔板数均在21 000以上,分离度在4.9以上,拖尾因子约1.0;含EDTA-2Na的原液与FeCl3溶液反应后的色谱图保留时间在11.002 min处出现吸收峰,不含EDTA-2Na的原液未见该峰;EDTA-2Na标准液的浓度在0 ～ 40μg/ml范围内,与峰面积呈良好线性关系,回归方程为:y=20.268 11 x+1.276 36,r=0.990 99;加EDTA-2Na的4种浓度的疫苗原液与FeCl3溶液反应后的回收率为98.0％～102.0％,RSD为1.55％;最低检测限为0.063 μg/ml,最小定量限为0.125 μg/ml;流动相pH为2.30、2.36、2.50及7.0时的保留时间分别为11.130、11.303、11.482和12.775.流动相保存1、3、5、7d的保留时间分别为11.130、11.179、11.259和11.313.4批水痘减毒活疫苗原液中EDTA-2Na的含量分别为0.318 634、0.347011、0.158

作者：任玉卓；杜岩；王昭；周柏宏；刘志强

来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 9期