目的 建立间接ELISA方法检测小鼠血清中a型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type a,Hia)荚膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)特异IgG含量,并对该方法进行验证.方法 用1-氰基-4-二甲基氨基吡啶-四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate,CDAP)活化Hia CPS制备酪胺化荚膜多糖(capsular polysaccharide-tyramined,CPS-Tyr),经Sepharose CL-4B层析柱分析其与Hia CPS的相对分子质量分布范围;对包被条件、封闭条件及显色时间进行优化,以碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG作为二抗,4-硝基苯磷酸二钠盐作为显色剂,建立小鼠血清中Hia CPS抗体的间接ELISA检测方法,并对该方法的特异性、线性及精密度进行验证.结果 CPS-Tyr与CPS相比,相对分子质量分布未发生明显变化.优化后的检测条件:包被抗原为CPS-Tyr,包被浓度为5μg/ml;以Costar 42592为检测酶标板;含1％(bovine serum albumin,BSA)的封闭液37℃恒温封闭2h;显色2h.Hia阳性血清经不同浓度的Hia CPS和CPS-Tyr吸收后,抗原吸收的抑制率与浓度依赖性明显,抑制率在0～ 100％之间.CPS-Tyr与CPS相比,抗原性保持一致,并且相同浓度的b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖抗原对阳性血清的抑制率为0;血清稀释倍数与抗体效价

作者：苗鑫；王欣茹；赵志强；刘佳；刘月萍；刘方蕾；李燕婷；戈钰雯；谢贵林

来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 11期