目的 建立小鼠胃组织中幽门螺杆菌SYBR GreenⅡ实时定量PCR检测方法,并进行验证,以进一步应用于疫苗免疫效果评价.方法 根据幽门螺杆菌尿素酶B亚基(urease B,UreB)在各菌株中相对保守的特性设计引物,优化其扩增条件,建立幽门螺杆菌SYBR GreenⅡ实时定量PCR检测方法,并对方法的专属性、精密性、准确性及检测限进行验证.结果 所设计的引物在阳性样本中可特异性地扩增出目的基因片段,且小鼠胃部中其他菌体的存在不影响反应结果的特异性.标准品质粒DNA模板含量在1×107～1×102拷贝/μl范围内线性良好,相关系数r2大于0.995,扩增效率在90％～110％之间.应用于小鼠胃组织幽门螺杆菌检测,具有较好的准确性和精密性,回收率为96.25％～101.42％,试验内和试验间相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于6％.用该方法检测高、中、低浓度的Hp菌液、并模拟定量Hp菌株在小鼠胃组织中的状态,试验内及试验间RSD均小于6％,精密度良好.其回收率大于80％,与平皿计数法一样,但灵敏度显著高于平皿计数法.结论 SYBR GreenⅡ实时定量PCR法快速有效,专属性良好,线性范围广,可重复性好,使用方便,可用于定量检测幽门螺杆菌在小鼠胃部组织中的定植,从而进一步应用于评估免疫反应对细菌定植的影响.
作者：陈敬；刘钰；汤重发；刘梅影；魏博
来源：中国生物制品学杂志 2016 年 29卷 12期
