目的 建立呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)滴度的间接免疫荧光检测方法,并进行验证.方法 以Synagis(Palivizumab)为一抗,荧光标记羊抗人IgG为二抗,建立用于RSV滴度检测的间接免疫荧光法,并对HEp-2细胞接种密度(3×104、4×104、5×104、6×104、7×104、8×104个/孔)、细胞培养液中胎牛血清浓度(2.5％、5％、10％、20％)、病毒培养时间(20、24、26、30、38、48h)、抗体稀释度[一抗:1∶(1 000/3)、1 ∶1 000、1 ∶3 000、1 ∶9 000,二抗:1 ∶(400/3)、1 ∶400、1 ∶1 200]进行优化.验证方法的特异性、线性范围、准确性、重复性.结果 建立的方法最佳工作条件:HEp-2细胞接种密度为6×104个/孔,胎牛血清浓度为2.5％,病毒培养时间为24～26 h,一抗稀释度为1∶1 000,二抗稀释度为1:400.RSV可见特异性荧光,狂犬病病毒、流感病毒、风疹病毒均未见荧光;RSV滴度理论值在1.70×107～5.43×103 FFU/mL范围内,与检测值呈良好的线性关系,回归方程为y=1.031 3 x-0.250 8,R2=0.989 7;准确性验证回收率在70％～130％范围内;重复性验证RSD均≤15％.结论 建立的RSV滴度间接免疫荧光检测方法具有良好的特异性、准确性、重复性,目检测周期短,可用干RSV滴度快速检测.

作者：宋月爽；陈晓旭；潘东；卢井才；张立娜；刘禹壮；原秀娟；段盛博；袁若森；赵慧

来源：中国生物制品学杂志 2022 年 35卷 8期