目的 建立可同时鉴别人副流感病毒1型(human parainfluenza virus type 1,HPIV1)、2型(HPIV2)、3型(HPIV3)的多重荧光定量RT-PCR方法,并进行验证.方法 通过数据库下载HPIV1、HPIV2和HPIV3全基因组序列进行比对分析,选择保守区域,针对这3种病毒分别设计特异性引物及探针,以人核糖核酸酶P(RNase P)为内质控,建立多重荧光定量RT-PCR检测方法,并对方法的灵敏度、特异性和精密度进行验证.采用建立的方法对192份临床样本进行检测.结果 经优化后,确定多重荧光定量RT-PCR反应体系为30μL,其中10 × NeoscriptRTase/UNG Multi mix 3 μL,5 × Neoscript RT Premix Multi Buffer 6 μL,HPIV1、HPIV2、HPIV3(100 μmol/L)上下游引物各 0.1 μL,HPIV1、HPIV2、HPIV3探针(100 μmol/L)各 0.05 μL,RNase P上下游引物(50 μmol/L)各 0.06 μL,RNase P探针(50 μmol/L)各 0.03 μL,模板 15μL,ddH2O补至 30 μL.反应条件:50 ℃ 20 min,95 ℃ 3 min;95 ℃ 15 s,54 ℃ 30 s,共45个循环,每个循环退火时收集荧光信号.建立的多重荧光定量RT-PCR方法对HPIV1、HPIV2和HPIV3的最低检测限均达到500 copies/mL;与甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、新型冠状病毒无交叉反应;3种不同浓度的重组质粒标准品混合物组内和组间

作者：程子恩；刘芷宁；曹鹏程；赵亚齐；侯广争；刘琪琦；刘馨

来源：中国生物制品学杂志 2023 年 36卷 9期