目的 建立恒河猴血清SARS-CoV-2变异株特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证.方法 以SARS-CoV-2 Beta变异株灭活疫苗为包被抗原建立特异性IgG抗体的间接ELISA检测方法,并优化方法的抗原包被浓度(1、2、4μg/mL)、待检血清稀释度(1∶800～1∶12 800)、PBST封闭液(含 1％BSA、2％BSA、1％脱脂奶、2％脱脂奶、1％BSA+1％脱脂奶)、封闭时间(30、60、90min)、二抗稀释度(1∶5 000、1∶10000、1∶15000、1∶20000)、血清及二抗孵育时间(30、60、90 min)、TMB显色反应时间(5、10、15、20、25、30 min).采用建立的方法检测60份恒河猴阴性血清,确定阴、阳性临界值.验证该方法的敏感性及精密性.采用建立的方法及微量中和试验分别检测44份恒河猴血清抗SARS-CoV-2 Beta变异株特异性IgG抗体及中和抗体水平,并比较二者的相关性和一致性.结果 确定最佳检测条件:抗原包被浓度为1 μg/mL;封闭液为含1％脱脂奶粉的PBST,封闭时间为30 min;待检血清稀释度为1∶1600,孵育时间为90min,二抗稀释度为1∶10000,孵育时间为30min;底物显色时间为25 min.该方法的阳性临界值为0.093,阴性临界值为0.084,位于两者之间判为可疑.5份阳性血清测得阳性结果的血清稀释倍数均为1∶51 200;精密性验证变异系数(CV)均＜15％.44份恒河猴血

作者：张文劲；李庆妮；唐定；陈云丰；华婉璐；刘元浪；李新国；卢佳

来源：中国生物制品学杂志 2023 年 36卷 11期