目的 探索建立1种串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析从Cohn法组份Ⅳ分离纯化蛋白C的方法,降低纯化蛋白C的成本,并实现血浆的综合利用.方法 4 ℃条件下,将Cohn法组份Ⅳ用PBS缓冲液抽提5 h,离心(6 500 g)40 min,上清液依次用0.45μm和0.22μm的滤膜过滤后,超滤透析;再通过串联离子交换层析和固相化金属螯合亲和层析,对蛋白C进行纯化.通过SDS-PAGE鉴定蛋白C的纯度;用考马斯亮蓝法通过紫外分光光度计测定总蛋白含量;通过WHO指定的发色底物法和凝固法(一期法)测定蛋白C活性.结果 纯化的蛋白C在SDS-PAGE图谱上呈现1条62 kD左右的蛋白带;经过离子交换层析,蛋白C的活性回收率为(48.19±9.22)
作者：王宗奎；林方昭；肖小璞；谢亦武；李长清
来源：中国输血杂志 2010 年 23卷 5期
