目的 建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用.方法 针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因组RNA为模板,进行RT-LAMP反应.扩增产物通过浊度、SYBR green I荧光染料显色及电泳三种方法观察结果.同时,用限制性内切酶Alu Ⅰ对扩增产物进行酶切鉴定.进行RT-LAMP特异性和敏感性试验.最后用建立的RT-LAMP方法检测55份小鼠临床样本.结果 RT-LAMP技术简单快速,等温条件下(65℃)一个小时内即可完成反应.酶切结果证明RT-LAMP产物正确.该技术具有很高的特异性和敏感性,可检测到的MHV RNA最低浓度为0.1 pg/μL,比逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)灵敏10倍.临床样本检测结果显示,与RT-PCR比较RT-LAMP方法的敏感性和特异性分别为100
作者：袁文；刘忠华；张钰；刘香梅；黄韧
来源：中国实验动物学报 2009 年 17卷 5期
