目的 运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中Bmp9基因片段,构建Bmp9基因敲除小鼠.方法根据Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成.sgRNA体外转录后和Cas9 mRNA混合后显微注射受精卵细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠.提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型.基因型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠.同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA和总蛋白,通过qPCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达.结果设计并合成20 bp的sgRNA并进行体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子.测序结果显示,突变小鼠存在两种基因型,一种为5 bp缺失突变,另一种为13 bp缺失并伴有1 bp插入突变.与野生型C57BL/6相比,qPCR、WB和免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显著降低.结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9基因敲除小鼠.
作者：周珂；辛智倩；刘佩娟；马翠；师长宏；王华；张海
来源：中国实验动物学报 2019 年 27卷 3期
