目的构建人胰胰岛素基因真核表达载体,为胰岛素基因研究奠定基础.方法从人基因组文库中扩增胰岛素基因的第一内含子,经测序证实其序列完全正确后,与pCMV-mINS中的mINS基因融合,构建成带有第一内含子的胰岛素基因组基因真核表达质粒pCMV-ImINS.分别用pCMV-mINS和pCMV-ImINS转染BHK细胞,经G418筛选,将阳性克隆传至20代后,用放免方法和免疫组化法分析胰胰岛素和/或胰岛素原在BHK细胞中的表达量情况.结果经放免测定,pCMV-mINS和pCMV-ImINS在BHK细胞中胰岛素和/或胰岛素原的表达量分别为4.077μIU/ml 和5.068μIU/ml.经免疫组化分析,pCMV-mINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为190.0±19.56;pCMV-ImINS在BHK细胞质中胰岛素表达水平的灰度值为186.4±10.24.结论在BHK细胞中胰岛素基因的第一内含子对胰岛素的表达起正调控作用.
作者：李华；王吉贵；刘维全；王苹；董婉维；齐顺章
来源：中国实验动物学杂志 2002 年 12卷 5期
