目的：为建立恒河猴 p53基因沉默模型，首先在细胞水平筛选和测定恒河猴 p53基因有效沉默靶点。方法测定非洲绿猴肾来源成纤维细胞 COS-7中 p53基因的表达水平；对恒河猴 p53基因做生物信息学分析，优选靶序列设计 shRNA，克隆入慢病毒载体 FUGW-TDT，转染 COS-7细胞，以 real-time PCR 检测 p53 mRNA 抑制水平，以 Western blot 检测 p53蛋白水平表达变化。结果在 COS-7细胞检测到 p53基因的表达；生物信息学筛选到3个靶片段，分别位于 p53 mRNA 的238～258 bp，681～701 bp，169～189bp，均在开放阅读框内； p53三个靶位点的沉默效率在 mRNA 水平分别为（87.17±4.03）％，（72.62±4.11）％，（76.22±0.98）％；在蛋白水平的沉默效率分别为（84.44±2.18）％，（71.04±1.18）％，（74.17±0.95）％。结论在细胞水平筛选得到3个有效的 p53基因沉默靶点，可用于后续的恒河猴基因沉默研究。
作者：苏静芬；张晨；李雨函；刘先菊；佟巍；向志光；SHI Liang；SHI Gui-ying；LIU Yun-bo
来源：中国比较医学杂志 2014 年 8期
