目的：应用CRISPR／Cas9技术构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。方法针对miRNA－29b1基因设计一段sgRNA，sgRNA和Cas9体外转录后显微注射至C57BL／6小鼠受精卵细胞。小鼠出生后取其基因组DNA进行测序以鉴定基因型，同时取小鼠心、肝、脾、肺、肾等脏器研磨后提取总RNA，通过real－time PCR分析miRNA－29b1在这些脏器中的表达。结果设计了20 bp的miRNA－29b1sgRNA并与Cas9一起进行了体外转录，显微注射小鼠受精卵细胞后获得miRNA－29b1基因突变小鼠。测序结果表明突变小鼠有两种基因型，一种为10 bp的缺失突变；另一种为22 bp的缺失突变，同时伴有3 bp的插入突变。与野生型小鼠相比，基因突变小鼠心、肝、脾、肺、肾等组织中miRNA－29b1表达量下降明显。结论应用CRISPR／Cas9技术成功构建miRNA－29b1基因敲除小鼠。
作者：赵勇；师长宏；赵亚；辛智倩；刘佩娟；张彩勤；白冰；白杰英；王华；张海
来源：中国比较医学杂志 2016 年 26卷 12期
