目的 利用腺病毒载体表达人FRNK基因,体外观察其对胃泌素干预下的结肠癌细胞Colo320WT中p190RhoGAP磷酸化和RhoA活性的影响.方法 2005年10月至2006年9月,武汉大学人民医院消化内科在中国科学院,武汉病毒所病毒学国家重点实验室,利用AdEasyTM系统在大肠埃希菌内同源重组构建表达人FRNK基因的腺病毒载体pAdhFRNK.脂质体转染pCR3.1-GR质粒于结肠癌细胞Colo320中,G418抗生素筛选出稳定表达胆囊收缩素-2受体/胃泌素受体(CCK-2R)的阳性克隆,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定.用10～8mol/L胃泌素干预Colo320WT细胞12 h和pAdhFRNK体外感染Colo320WT细胞2 d后,再用10～8 mol/L的胃泌素干预细胞12 h,然后用免疫沉淀方法检测磷酸化的p190RhoGAP的表达,pull-down测定RhoA的活性.结果 在胃泌素干预12 h后的磷酸化的p190RhoGAP的表达量明显增加,RhoA活性降低,而用pAdhFRNK感染后胃泌素干预的细胞中磷酸化p190RhoGAP表达又降低,RhoA活性却增加.结论 hFRNK基因可明显阻断外源性胃泌素引起Colo320WT细胞中p190RhoGAP磷酸化的表达和RhoA的活性.
作者：曹俊；于皆平；刘超红；陈新文；罗和生；于红刚
来源：中国实用内科杂志 2007 年 27卷 8期
