为研究小鼠胚胎干细胞(ESC)定向诱导分化为造血干细胞( HSC)在体内重建造血的功能,将小鼠El4ESC诱导为拟胚体(EB),EB细胞利用Transwell非接触共培养体系在人主动脉-性腺-中肾(AGM)区、胎肝(FL)及骨髓(BM)基质细胞饲养层上依次诱导,收获各阶段EB细胞,以流式细胞仪检测Sca-1+ c-Kit+细胞含量,并接种于NOD-SCID小鼠以检测体内致瘤性.再将不同诱导阶段的EB来源细胞移植到J经致死量60Coγ射线照射的BALB/c雌鼠,将受鼠随机分为5组:①AGM组,②AGM+ FL组,③AGM+ FL+ BM组,④照射对照组,⑤正常对照组.观察各组生存率、造血重建和植入状况.结果显示:EB细胞经人AGM区和FL基质细胞共培养后Sca-1+ c-Kit+细胞达到峰值(21.96±2.54)％；NOD-SCID小鼠在接种经人AGM区基质细胞诱导的EB细胞后可出现畸胎瘤,而接种经人AGM区+FL基质细胞诱导EB细胞后未见肿瘤形成；AGM组及照射对照组动物全部死亡,而AGM+FL组及AGM+FL+BM组生存率分别为77.8％、66.7％,移植后21天外周血象基本恢复,在存活受鼠检测到供体来源Sry基因.结论:按胚胎造血发育程序,体外经人AGM区、FL及BM基质细胞连续诱导小鼠ESC分化的HSC可安全、有效地重建体内造血.
作者：蔡耘；张绪超；黄绍良；陈惠芹；吴北燕
来源：中国实验血液学杂志 2011 年 19卷 5期
