本研究旨在利用红细胞自然沉降性原理,以传统的全骨髓贴壁法为基础,探讨一种改良后简便而高效的人骨髓间充质干细胞培养方法.采用6孔板培养细胞,将骨髓标本用MSC完全培养液培养48 h,吸取上层无红细胞的上清层,置于新的培养孔以分离获取MSC.用倒置显微镜观察细胞形态及贴壁情况,记录细胞首次贴壁时间、首次传代时间,并以传统全骨髓贴壁法为对照;应用流式细胞术检测细胞周期、细胞表面标记;用油红O及碱性磷酸酶试剂盒分别对MSC成脂、成骨能力进行鉴定;应用计数板计数法描绘第1代,第3代,第5代MSC增殖曲线.结果表明,用改良法培养的MSC高表达CD90、CD105、CD13、CD44,低表达CD14、CD45、CD34;细胞周期中G0/G1期88.76％,G2/M期3.04％,S期8.2％,符合干细胞周期特征;增殖曲线呈典型“S”型;油红O与碱性磷酸酶染色均为阳性.同时与传统方法相比,改良方法的细胞贴壁率显著高于传统方法(P =0.0004),首次贴壁时间短(P＜0.0001)、首次传代时间短(P =0.001).结论:骨髓标本培养48 h后的上清层中含大量贴壁活性的悬浮MSC,改良方法是一种比传统贴壁法更具有便捷、高效等优点的培养方法.
作者：王晓庆；仲照东；陈智超；邹萍
来源：中国实验血液学杂志 2014 年 22卷 2期
