目的:构建并鉴定血管血友病因子裂解酶(ADAMTS13)单克隆抗体,并研究其生物学功能.方法:利用真核表达的重组血浆金属蛋白酶ADAMTS13截断型蛋白(ADAMTS13-T7)纯品免疫BALB/c小鼠,经标准单克隆抗体技术制备单克隆抗体.用ELISA方法鉴定单克隆抗体的特异性;应用免疫印迹技术确定单克隆抗体与全长ADAMTS13的识别能力;观察单克隆抗体对ADAMTS13水解vWF的影响.结果:最终获得6株抗ADAMTS13的单克隆抗体,克隆号分别为1Gll、2Fll、6G3、9El、10A8、10B4.经ELISA鉴定,纯化后的单克隆抗体IGll和2Fll的效价最高,与截断型ADAMTS13-T7蛋白结合能力比较,明显高于全长ADAMTS13蛋白.Western blotting结果显示,6个单克隆抗体都能与全长ADAMTS13结合,其中1Gll和2Fll条带最亮.功能实验表明,在变性条件下1Gll和2F11能够明显抑制ADAMTS13水解vWF,并随着单克隆抗体浓度的增加而抑制作用增强.结论:成功获得针对ADAMTS13的单克隆抗体,其中两株为抑制性功能抗体.
作者：马珍妮；凌婧；沈飞；谢丽倩；殷杰；苏健；阮长耿
来源：中国实验血液学杂志 2016 年 24卷 4期
