目的构建含有肝细胞生长因子(HGF)NK4基因的重组腺病毒载体,为应用HGF/NK4进行肿瘤基因治疗奠定实验基础.方法应用AdEasy腺病毒载体系统,将PCR扩增所得的NK4基因片段与穿梭质粒pShuttle-CMV进行连接,获得重组质粒pShuttle-CMV-NK4,将该质粒与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化大肠杆菌BJ5183获得重组腺病毒质粒pAdCMV-NK4,用该质粒转染293细胞包装产生出重组腺病毒rvAdCMV-NK4.重组腺病毒分别经电子显微镜技术及RT-PCR、Western Blot等方法进行鉴定.结果得到含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV-NK4,电子显微镜下可见典型腺病毒颗粒形态,RT-PCR及Western Blot分析显示rvAdCMV-NK4感染293细胞后NK4基因可有效转录并表达.结论成功构建出含有NK4基因的重组腺病毒rvAdCMV-NK4,为下一步开展关于NK4基因的肿瘤治疗提供了基础.
作者：介建政；王健伟；王巍；姜秀丽；魏强；洪涛
来源：中国实验诊断学 2003 年 7卷 5期
