目的构建人VEGF165腺病毒表达载体,探讨应用血管内皮生长因子(VEGF)基因治疗脑梗死的可行性.方法采用分子克隆技术,以质粒hVEGF165·SR为模板,扩增hVEGF165成熟cDNA.经穿梭质粒PShuttle克隆到腺病毒质粒上,构成Adeno-VEGF165腺病毒重组质粒,经酶切及测序鉴定正确后,包装成为重组Adeno-VEGF165腺病毒,并进行电镜观察及滴度测定.用免疫印迹及免疫组化方法检测VEGF蛋白的表达.结果经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功,电镜显示包装细胞中有病毒存在,包装的病毒滴度为8 × 1010 pfu/ml,免疫印迹及免疫组化检测有VEGF165蛋白的表达,而对照未见VEGF165转录和表达.结论构建的VEGF165腺病毒表达载体可在体外表达,VEGF基因有可能用于治疗脑梗塞.
作者：张海鸥；吴军；林凯华；易黎
来源：中国实验诊断学 2004 年 8卷 4期
