目的:将 Shh 基因用慢病毒载体转染甲状腺乳头状癌(PTC)原代细胞中,观察 Shh 对 PTC 细胞体外生物学性状的影响。方法在建立慢病毒载体 pGC-FU-Shh-GFP 转染 PTC 细胞,稳定过表达 Shh 蛋白模型基础上,设立转染实验组和阴性对照组。MTT 法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell 实验检测细胞迁移能力,检测 Sonic hedgehog 通路相关基因 mRNA 与蛋白表达变化,与阴性对照组检测结果进行比较。结果高表达Shh 细胞生长曲线较陡直,生长速度较阴性对照组显著提高(P <0.05);Shh-PTC 细胞24 h 后 S 期上升至20.88%, Shh-PTC 细胞48 h 后 G1期上升至83.78%;实验组穿透滤过膜细胞数量明显增加(P <0.05)。转染后 SMO、Gli1、PTCH 蛋白的表达均高于对照组,表达量分别是对照组的1.154倍,1.062倍和1.205倍。结论Shh 明显促进 PTC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。在 PTC 的发生、发展中 Sonic hedgehog 通路激活是激发或促进因素,该信号通路可能促进 PTC 的生长、转移。
作者:边学海;徐为然;张广;张纯海;周乐;李世杰;孙辉
来源:中国实验诊断学 2014 年 9期