目的：建立新型的均相检测技术AlphaLISA（Amplifed Luminescent Proximity Homogeneous Assay）法，检测原发性肝细胞癌（Hepatocelluar carcinoma，HCC）病人石蜡包埋切片组织（Formalin-fixed and paraffin-embedded tis-sue，FFPE）中乙型肝炎病毒 X蛋白（HBx）。方法采用针对 HBx蛋白不同表位的两种单克隆抗体 X36C和3F6-G10，将其中一种抗体 X36C与受体微珠（Acceptor Beads）连接，另一种抗体3F6-G10生物素化，再将 HCC病人 FFPE总蛋白提取液、供体微珠（Donor Beads）及上述两种处理后的抗体在23℃共同孵育90 min后，用 EnSpire2300多功能酶标仪检测信号值。结果 FFPE 蛋白提取液检测信号值为4667，HBx蛋白标准品检测信号值为3606；FFPE蛋白提取液样本对照、试剂对照1（Bio-3F6-G10＋Acceptor-X36C＋Donor Beads）、试剂对照2（buffer）的信号值分别为5、823、79；当生物素化抗体浓度为0．1625nM时，HBX检测信号达到最大峰值，即 AlphaLISA出现 Hooking Effect；Al-phaLISA法检测 HBX阈值下限为5pg。结论本实验成功建立了 AlphaLISA法，用于检测 HCC病人 FFPE中的HBX。实验操作过程简单快捷，敏感性高于传统的 ELISA技术。

作者：刘颖娟；夏维；刘松梅；沈璠；周新；张红

来源：中国实验诊断学 2014 年 11期