目的 沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的组蛋白去乙酰化酶,可作为致癌基因通过抗凋亡活性在肿瘤发生中起作用,并涉及自噬,衰老,凋亡,增殖等多种细胞过程.因此,本研究通过基因敲除去乙酰化酶SIRT1,探究其对靶向结合miR-138b-5p对前列腺癌细胞PC-3氧化应激和凋亡的作用.方法 设计合成SIRT1 shRNA,将inhibitor和shRNA-SIRT1单独或联合转染PC-3细胞,RT-PCR检测miR-138b-5p和SIRT1的表达水平;克隆形成实验检测细胞的生长能力;Hoechst33258染色检测细胞凋亡;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及细胞内丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测线粒体膜电位的变化;免疫印迹法检测Caspase-3,Caspase-9,Bax/Bcl-2的蛋白表达.结果 miR-138-5p mimic转染PC-3细胞后,miR-138-5p的表达显著升高(P<0.05),SIRT1的表达显著降低(P<0.05).inhibi-tor能明显减弱miR-138-5p对SIRT1的表达的抑制作用(P<0.05).shRNA-SIRT1能显著降低SIRT1的表达水平(P<0.05).敲除SIRT1明显抑制PC-3细胞克隆形成(P<0.05).同时,敲除SIRT1线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率增加,促进细胞凋亡(P<0.05).敲除SIRT1还能明显增加SOD活性,降低MDA含量及LDH活力(P<0.

作者：张志明；薛炜；聂志勇；桑楠；邱建新；张波

来源：中国实验诊断学 2020 年 24卷 11期