目的：筛选并验证可调控结肠癌细胞增殖的微小RNA﹙miRNA)。方法以癌基因线粒体转录因子A﹙TFAM)作为靶基因,通过miRWalk 2.0软件筛选可能调控结肠癌增殖的miRNA。通过实时荧光定量PCR检测miRNA在30例结肠癌手术标本和3种结肠癌细胞系﹙SW480、HT-29和HCT116)中的表达。选取其中表达量最低的miR-204和SW480进行后续研究。双荧光素酶报告基因实验验证TFAM和miR-204的作用关系。分别应用miR-204慢病毒和anti-miR-204慢病毒上调和下调miR-204的表达,通过Western blot检测慢病毒感染后SW480细胞中TFAM蛋白水平的变化；并采用MTT实验和BrdU实验观察慢病毒感染后SW480细胞增殖能力的变化。结果初筛获得miR-204、miR-211、miR-214、miR-381、miR-590-3p 5种miRNA,其中miR-204、miR-211、miR-214和miR-381在结肠癌组织中的表达较癌旁组织明显降低﹙P<0.05),在3种结肠癌细胞中的表达亦较正常结肠细胞降低﹙P<0.05),其中miR-204的表达量最低；而miR-590-3p表达水平则在结肠癌组织和3种结肠癌细胞中均明显上调﹙P<0.05)。结肠癌组织中miR-204表达与TFAM表达呈显著负相关﹙P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验显示TFAM与miR-204可直接结合。通过慢病毒感染上调miR-204表达后,SW480细胞中TFAM蛋白表达下降,细胞增殖能力升

作者：吴恺明；何裕隆；李广华；彭建军

来源：中华胃肠外科杂志 2015 年 10期