[目的]建立了检测结核分枝杆菌的高灵敏度和高特异性PCR扩增体系.[方法]以国内结核病人常见病原菌-结核分枝杆菌、牛分枝杆菌特异性抗原Pab编码基因上的419bp段作为扩增靶序列,扩增引物序列为5'-ACC、ACC、GAG、CGG、TTC、GCC、TGA-3'、5'-GAT、CTG、CGG、GTC、GTC、CCA、GGT-3'.[结果]变性温度选择69℃-70℃.PCR扩增体系的成份经优化,选择引物浓度为0.30μmol/L,dNTP浓度为150μmol/L,MgCl2浓度为3.5mmol/L.[结果]该体系对11株标准菌株和12株临床分离菌株提纯的染色体进行扩增,其中卡介苗、结核分枝杆菌、牛分枝杆菌的扩增为阳性,其他分枝杆菌为阴性.[结论]以提纯的染色体DNA作模板,该体系可检出5fg结核杆菌染色体DNA,相当于一个结核分枝杆菌.
作者：王洪君；周宜开；王家玲
来源：中国卫生检验杂志 2002 年 12卷 2期
