目的 筛选与RapGAP相互作用的蛋白质,为进一步研究人源Rap1 GAP介导的信号转导通路、揭示其与肿瘤的关系提供实验依据.方法 选用与Rap1GAP同源的来自美丽线虫的RapGAP作为饵蛋白,以来源于美丽线虫的cDNA文库作为靶蛋白,应用pPC97、pPC86组成的酵母双杂交系统筛选cDNA文库中与RapGAP相互作用的蛋白质.结果 通过营养缺陷平板(-LTH)筛选出63个拟似阳性菌落.经过LacZ鉴定,19个菌落为阳性,其中7个为强阳性.提取来自19个酵母菌落中的重组DNA,经PCR扩增,12个菌落出现阳性结果.将该19个重组DNA分别电转化入DH5α细菌,涂板培养后,每板挑取4～ 10个克隆,通过SalⅠ和NotⅠ双酶切鉴定进行阳性克隆筛选.将阳性克隆的重组DNA进行序列测定.测序结果与GenBank比较,其中4个克隆的DNA片段为Y39b6a基因片段、2个为RapGAP、1个为苯丙氨酸4-羟化酶、1个为细胞色素C氧化酶,还有1个DNA片段编码美丽线虫特有的小分子蛋白的基因片段,其余11个DNA片段不编码已知蛋白质.结论 初步筛选出与RapGAP相互作用的蛋白质,特别是其中有2个克隆为RapGAP,提示RapGAP可能以二聚体的方式存在.
作者：苗小艳；孔繁斗；石敏；Bos JL；赵春艳
来源：中国微生态学杂志 2015 年 27卷 6期
