目的 获得纯化的诺如病毒(NV)衣壳蛋白VP1,免疫动物制备多克隆抗体.方法 提取粪便样品中诺如病毒RNA,逆转录得到cDNA文库,通过PCR扩增获取VP1基因序列,构建到大肠埃希菌原核表达系统中诱导表达重组VP1蛋白.使用镍柱亲和层析法对重组蛋白进行纯化,十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝法(BSA)对重组蛋白的纯度与浓度进行分析,以重组的VP1蛋白为抗原,免疫雄性SPF级SD大鼠获得多抗血清,用ELISA测定抗体效价、Western blot检测抗体特异性.结果 成功地构建出重组表达载体VP1-pET28a,并将其在大肠埃希菌BL21 (DE3)中稳定地表达诱导重组蛋白.ELISA测其多抗血清的平均效价为1∶200 000,Western blot检测抗体在原核和真核特异性很高.结论 本实验成功地利用原核表达系统表达诺如病毒衣壳蛋白VP1,为进一步研究诺如病毒的诊断和疫苗开发提供了条件.
作者：仉秋实；苑荣亮；井申荣
来源：中国微生态学杂志 2017 年 29卷 8期
