目的 利用重组酶聚合酶扩增(Recombinase Polymerase Amplification,RPA)技术检测结核分支杆菌.方法 采用Axxin T8-ISO扩增仪(TwistDX公司),反应温度设置为39℃,反应时间20 min.检测分为实验组、阳性对照组和空白对照组.实验组模板DNA从痰液中提取.阳性对照模板DNA为H37Rv标准菌株样本DNA及卡介苗提取的DNA.空白对照为蒸馏水.结果 RPA技术可在20 min内明显区分103～106 copies/mL的阳性质粒与阴性对照.对分离培养的结核杆菌(H37Rv) DNA及卡介苗提取的DNA,阳性克隆质粒进行等温扩增,结果结核杆菌分离株DNA、卡介苗DNA、阳性克隆质粒均有阳性扩增反应,而非结核分枝杆菌分离株和阴性对照无阳性扩增反应.灵敏度为100％,特异性为82％.结论 RPA技术利用了重组酶、单链结合蛋白、DNA聚合酶代替了传统PCR变性、退火、延伸的热循环过程,在常温25℃～42℃、15～30 min内即可实现痕量核酸的快速扩增,可应用于快速检测人结核分枝杆菌,是一种全新的检测方法.
作者：单纯；吴培；苏瑞霞；高超；喻永新；张洪英；许银芳
来源：中国微生态学杂志 2019 年 31卷 2期
