目的：观察肝素对脂多糖（LPS）刺激人内皮细胞分泌趋化因子水平的影响，探讨肝素对核转录因子-κB（NF-κB）信号通路的作用机制。方法体外培养人肺微血管内皮细胞株（HPMEC），取传代培养至第3～5代的细胞用于实验。将细胞分成对照组、LPS刺激组、1kU/L或10kU/L肝素+LPS组及NF-κB抑制剂甲苯磺酰赖氨酸氯甲酮（TLCK）组（TLCK+LPS组）。LPS刺激组加LPS10mg/L；不同剂量肝素预处理组于LPS刺激前15min分别加入1kU/L或10kU/L的普通肝素；TLCK+LPS组于LPS刺激前30min加用TLCK10μmol/L；对照组加入与LPS等量的磷酸盐缓冲液（PBS）。各组于LPS刺激后1h收集细胞，采用免疫荧光法观察NF-κB核移位情况，以明确肝素对NF-κB的活化作用；LPS刺激后3h和6h收集细胞上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定白细胞介素-8（IL-8）及单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的水平，以明确肝素对LPS刺激HPMEC产生趋化因子的影响以及对NF-κB信号通路的作用机制。结果①荧光显微镜下显示，对照组NF-κB大部分位于胞质中；LPS刺激组NF-κB由胞质向胞核转移明显增多；1kU/L和10kU/L肝素预处理均可明显抑制LPS诱导的NF-κB活化，以10kU/L肝素效果较好。②与对照组比较，LPS刺激后3h和6h细胞上清液中IL-8及MCP-1水平均明显增高〔IL-
作者：李旭；马延全；陈恬璐；唐洁；马晓春
来源：中华危重病急救医学 2016 年 2期
