目的:探讨在脓毒症模型中几丁质酶-3样蛋白1（CHI3L1）介导骨骼肌干细胞损伤的潜在机制。方法:用6种浓度的脂多糖（LPS）刺激体外培养的小鼠骨骼肌卫星细胞，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）和细胞增殖与毒性试剂盒（CCK-8）筛选出细胞处理最佳浓度。构建CHI3L1过表达和干扰载体转染骨骼肌卫星细胞，采用聚合酶链反应（PCR）、蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）验证转染效率。将细胞按随机数字表法分为空白对照组（不加任何干预的细胞）、模型组（LPS刺激未转染的细胞）、过表达CHI3L1组（LPS刺激转染了CHI3L1过表达质粒的细胞）、过表达CHI3L1对照组（LPS刺激转染了空载质粒的细胞）、干扰CHI3L1组（LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列的细胞）、干扰CHI3L1对照组（LPS刺激转染了CHI3L1干扰序列阴性对照的细胞）。采用ELISA检测细胞外天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1（caspase-1）和白细胞介素-1β（IL-1β）的含量；采用Western blotting检测细胞中IL-1β、信号转导和转录激活因子3（STAT3）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化Akt（p-Akt）的蛋白表达水平。结果:根据CCK-8和ELISA检测结果筛选出最佳浓度为5 mg/L的LPS进行后续实验，且PCR、Western blotting证实转染有效。与空白对照组比较，模型组细胞外IL-1β
作者：李福星；盛志勇；周仪华；李婧滢；许建宁
来源：中华危重病急救医学 2021 年 33卷 12期
