目的 构建含尿酸氧化酶与肌酐水解酶融合基因的质粒并转化大肠杆菌,使其能同时分泌该两种酶分解尿酸及肌酐.方法 根据GenBank数据库已知的尿酸氧化酶基因设计引物,扩增到去掉终止密码子的尿酸氧化酶基因中,并使其连接到质粒pGM36e上构建成pGM36e-U,然后根据已知肌酐水解酶基因设计引物扩增肌酐水解酶基因,把其连接到质粒pGM36e-U中尿酸氧化酶基因后构建成重组质粒pGM36e-U/C,转化大肠杆菌,筛选鉴定重组大肠杆菌,并进行SDS-PAGE分析.将工程菌于特定浓度肌酐和尿酸的培养基中培养24h,取培养液测定肌酐和尿酸浓度.结果 重组质粒得到大小约1.68 kb基因片段.为尿酸氧化酶及肌酐水解酶之合.转化大肠杆菌后尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性得到表达.肌酐分解率提高43.50％,尿酸分解率提高42.32％.结论 构建的含复合基因的重组质粒转化大肠杆菌后能表达尿酸氧化酶及肌酐水解酶活性.分解尿酸和肌酐.
作者：程新；刘芳；张彦新；蒋云生
来源：中国现代医学杂志 2013 年 23卷 13期
