目的 采集健康志愿者和肿瘤患者的外周血单个核细胞(PBMCs)进行自然杀伤细胞(NK)的扩增培养,培养过程中白细胞介素IL-2、IL-12、IL-15、IL-18以不同组合及不同方式添加,探究体外培养NK细胞的细胞因子最佳组合和添加方式.方法 根据细胞因子组合及添加方式的不同,将NK培养分为3组.A组:IL-2+IL-15组,B组:IL-2+IL-12+IL-15+IL-18组,C组:IL-12+IL-15+IL-18预处理/IL-2组.培养过程中第7天和第14天分别取样统计各组细胞因子培养后的细胞数量,并使用流式细胞仪检测NK细胞表面分子表达;将NK细胞与K562细胞共培养,然后ELISA测定NK细胞的IFNγ释放量,CSFE/7-AAD法检测NK细胞的杀伤活性.结果 3组不同的培养方式所得细胞的扩增倍数差异无统计学意义,随着培养时间的增加,NK细胞的比例也逐渐上升,3组间NK细胞比例差异无统计学意义(P>0.05).NK细胞表面CD25(IL-2Rα)的表达情况比较,差异有统计学意义(P<0.05),C组的阳性率高于A和B组.IFN-γ的释放量和NK细胞的体外杀伤活性一致,均为C组高于A和B组.对肿瘤患者的NK细胞,C组的细胞因子添加方式也能很好的进行扩增(CD3-CD56+细胞比例大于50％).结论 C组中的细胞因子预处理方式能够高效扩增NK细胞,与A或B组联合添加的方式比较,该方式能显著激活NK细胞的杀伤活性.
作者：申重阳；幸倚帆；谭小虎；陈勇军
来源：中国现代医学杂志 2018 年 28卷 28期
