目的利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建一种能在血管内皮细胞(VEC)中高效、安全表达t-PA的pcDNA3.1(+)/t-PA真核表达重组质粒.方法采用高效Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取总RNA,RT-PCR获得t-PA cDNA,并将真核表达质粒pcDNA3.1(+)和t-PA基因片段分别双酶切,将回收的pcDNA3.1(+)大片段(5.0kb)与t-PA基因片段(1.9kb)重组.对pcDNA3.1(+)/t-PA质粒进行酶切鉴定和测序.脂质体介导pcDNA3.1(+)/t-PA转染血管内皮细胞,并用RT-PCR法和ELISA法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测t-PA的表达情况.结果成功地从胎儿肺组织中克隆了t-PA基因,并构建了以pcDNA3.1(+)为载体的真核表达质粒载体.pcDNA3.1(+)/t-PA转染血管内皮细胞后,t-PA表达增加,(n=6,P＜0.01).结论含t-PA基因真核表达质粒构建成功.
作者：吴忠均；杨素芬；李昱；吴维伟；郑树森；时德
来源：中国心血管杂志 2004 年 9卷 1期
