目的 构建MGMT基因的siRNA(small interfering RNA)质粒载体pRNAT-H1.1/Neo-MGMT siRNA,为进一步研究siRNA对MGMT基因的抑制作用,探讨MGMT在胶质瘤的化疗耐药及逆转胶质瘤细胞耐药表型中的作用奠定基础.方法 针对MGMT的靶序列设计合成二三条shRNA(small hair RNA)的DNA模板单链,同时模板链两端分别设计BamHⅠ和Hind Ⅲ限制酶切位点.退火形成siRNA载体插入片断.用限制性内切酶将pRNAT-H1.1/Neo线性化,T4连接酶将插入片断插入pRNAT-H1.1/Neo中.重组质粒转化大肠杆菌DH5α后培养出阳性克隆,抽提质粒,经酶切、电泳和测序的方法鉴定质粒构建是否成功.结果 设计构建三条针对MGMT基因的siRNA质粒载体,经双酶切,在2
作者：高薇；王中；周岱；虞正权
来源：中国血液流变学杂志 2010 年 20卷 3期
