目的 筛选与先天性心脏病(CHD)相关的DACT1基因的错义突变,并研究其生物学功能.方法 研究对象为中国山东地区汉族人群,病例组为2008年8月至2011年1月散发CHD的连续就诊患儿,排除综合征型和有心脏病家族史患者;对照组为同时期收集的排除CHD以及有心脏病家族史的健康儿童.①提取两组外周静脉血WBC的基因组DNA,靶向DACT1基因的编码区进行测序,将测序结果中的单核苷酸变异(SNV)与数据库dbSNP(version137)和千人基因组比对,病例组与对照组的SNV比对,筛选出病例特异性的新发现或稀有DACT1突变位点,通过Sanger法验证.②构建野生型和各突变型DACT1的表达质粒,在HEK293T细胞中通过蛋白质免疫印迹实验观察DACT1和DVL2蛋白表达水平.③通过双荧光素酶报告基因实验观察突变后DACT1对经典Wnt信号通路和非经典Wnt信号通路(PCP)调控作用的变化.结果 病例组404例,年龄(2.9±2.7)岁;对照组213名,年龄(7.1±3.7)岁.病例组和对照组的男女比例分别为1.2:1和1:1,均为汉族儿童.在3例CHD中筛选到4个DACT1基因编码区的新发现或稀有的错义突变c.1486C>T(p.S441L)、c.1598C>A(p.S478R)、c.1659G>C(p.E499Q)和c.1891T>A(p.M576K),经Sanger测序验证均为杂合突变.DACT1S478R和DACT1E499Q在不同物种中保守性很高.DACT1S441L SIFT评价为有

作者：王鹤；彭瑞；段文元；王红艳；姚晓英

来源：中国循证儿科杂志 2019 年 14卷 2期