目的:运用RNAi技术下调平衡型核苷转运蛋白1(hENT1)的表达,观察hENT1下调后5-氟尿嘧啶(5-FU)对胰腺癌Panc-1细胞的毒性改变情况.方法:设计并合成能表达特异性针对hENT1的shRNA(small hairpin RNA)的DNA序列,构建pSilence-hENT1 4.1-CMV neo质粒.用脂质体法将pSilence-hENT1 4.1-CMV neo质粒转染胰腺癌Panc-1细胞,并以含G418(600 μg/mL)的培养液筛选阳性转染细胞(pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1).RT-PCR检测下调pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞hENT1 mRNA表达的效果及稳定性.MTT法检测细胞在含5-FU(0～1.56×106 nmol/L)的培养液中48 h后的生存率,并计算IC50.结果:测序显示重组质粒pSilence-hENT1 4.1-CMV neo中插入片段序列正确.RT-PCR结果显示,pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞hENT1 mRNA表达水平下调,并在两个月内(共传代15次)保持相对稳定.MTT结果显示,pSilence-hENT1 4.1-CMV neo Panc-1细胞组氟尿嘧啶的IC50显著下降,为Panc-1细胞组IC50的51.52
作者：陈武强；刘胜利；郑杰
来源：中国药科大学学报 2007 年 38卷 4期
