目的:利用转入人免疫球蛋白基因的五特征小鼠制备全人源血管内皮生长因子165(VEGF_(165))单克隆抗体,并初步探讨该单抗的抗肿瘤活性.方法:采用常规杂交瘤细胞融合技术,利用间接ELISA效价测定方法筛选能稳定分泌单抗的杂交瘤细胞株;比较了五特征小鼠和BALB/c小鼠的免疫效果;亲和色谱法从腹水中纯化单抗;利用分泌VEGF的人膀胱癌细胞系T24细胞考察单抗的体外抗肿瘤活性.结果:成功获得了4株能稳定分泌表达单抗的杂交瘤细胞株(V_2,V_(50),V_(71),V_(75)),建立了间接ELISA效价测定方法,发现同样方法免疫的BALB/c鼠血清效价约为五特征小鼠的10倍.采用甘露糖结合蛋白(MBP)亲和色谱柱从腹水中获得了纯化的单抗样品,经SDS-PAGE和Western blotting检测,证实该单抗为全人源VEGF_(165)IgM单抗.体外抗肿瘤活性结果显示,V_2、V_(75)单抗对人类膀胱癌细胞系124细胞的增殖有较好的抑制作用.结论:可利用五特征小鼠制备全人源抗VEGF_(165)单抗,该单抗具有潜在的抗肿瘤活性.
作者：刘煜；顾月；恽冬杰；陈建泉；刘思国；张爱民
来源：中国药科大学学报 2009 年 40卷 3期
